人外周血單個核細胞 Human PBMC

人外周血單個核細胞 Human PBMC

外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）是指外周血中具有單個細胞核的細胞，包括淋巴細胞，單核細胞等。

提取方法：
全血樣本聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-Hypaque）密度梯度離心分離

其他種屬PBMC

猴外周血單個核細胞 Monkey PBMC

大鼠外周血單個核細胞 Rat PBMC

小鼠外周血單個核細胞 Mouse PBMC

比格犬外周血單個核細胞 Dog PBMC

豬外周血單個核細胞 Minipig PBMC

兔外周血單個核細胞 Rabbit PBMC

外周血單個核細胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），是指外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞（Lymphocyte）、單核細胞（Monocyte）、樹突狀細胞（DC）和其他少量細胞。PBMC可利用健康人或動物供體的外周血，通過Ficoll密度梯度離心，磁珠分選等步驟獲得，主要包括淋巴細胞和單核細胞。

Ficoll是蔗糖的多聚體，中性，平均分子量400,000，當密度為1.2g/mL，未超出正常生理性滲透壓，也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。

人外周血單個核細胞 Human PBMC

不同細胞類型的比例
PBMC中大部分都是淋巴細胞，包括B細胞和T細胞，其中CD3 T細胞又占了淋巴細胞中絕大部分(45-70%)。這些T細胞都處于初始（naive）狀態，即已經成熟了但沒有受到抗原刺激。 在正常人中，只有非常小的一部分初始T細胞會因抗原識別而被激活。同樣的B細胞也都處于初始狀態。相對于淋巴細胞，單核細胞的比例在10-30%，收到刺激之后會發育成樹突狀細胞(DC)或巨噬細胞。干細胞的比例非常低，只有0.1-0.2%，因此很難從全血樣本中分離到。

細胞運輸與保存
（1）干冰運輸，收到細胞后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；
（2）T25瓶運輸細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存，具體操作步驟見細胞培養步驟。

PBMC收到后注意事項：
（1）收到PBMC細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時反饋。
（2）先不打開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放培養箱靜置四小時，穩定細胞狀態，切忌在溫箱內靜置過夜。
（3）靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
（4）貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內的培養基，留8ml繼續培養至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。
（5）細胞瓶內的培養基含血清和雙抗，可收集后4℃保存備用，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基，一半用自備的培養基，使細胞逐漸適應培養條件，以免因不適應而造成生長狀態不佳。
（6）細胞胰酶消化液建議使用PBS配制。