大腸埃希氏菌O157 LAMP檢測試劑盒

產品說明

CSPP多重PCR檢測試劑盒可同時檢測空腸彎曲菌(C. jejuni)，結腸彎曲菌(C. coli)，海鷗彎曲菌(C. lari)，烏普薩拉彎曲菌(C. upsaliensis)，和胎兒彎曲菌胚胎亞種(C. fetus subsp. fetus)等5種常見的彎曲菌屬致病細菌。

產品組成 （50次，20 µL PCR）

* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP，含MgCl₂的PCR優化反應緩沖液，以及電泳時所必需的色素試劑。使用頻率高時一旦融解請于4^oC保存或分裝保存。

儲存條件

-20^oC長期保存。多次反復凍融會降低檢測效率。

使用說明

• DNA樣本處理、反應體系配制、核酸擴增和結果鑒定等各步驟應分域進行，以避免交叉污染。
• 細菌基因組DNA可使用市售試劑盒提取，也可按以下方法快速制備：

• 從平板上挑取適量菌落，加入含有200 µL ddH₂O的滅菌離心管中，渦旋震蕩混勻，肉眼可見菌液渾濁即可。
• 菌液煮沸10 min，冷卻至室溫后，13,000 rpm離心2 min。
• 將上清移至新離心管中，即得可用于本試劑盒檢測的細菌DNA模板。

• PCR反應液配制：

2 X Master Mix 10 µL

Primer Mix 4 µL

陽性對照/樣品DNA 2 µL

H₂O 4 µL

反應終體積 20 µL

• PCR反應條件：

95^oC 預變性 6 min

95 ^oC 變性 30 sec

30個循環 59 ^oC 復性 30 sec

72 ^oC 延伸 30 sec

72 ^oC 延伸  7 min

• 瓊脂糖凝膠（2%）電泳檢測15 µL PCR擴增產物 (100 V，50 min)。5種彎曲菌屬細菌的檢測結果如下圖所示，其中23S rRNA作為擴增反應的內參照，在所檢測的5種彎曲菌屬細菌均應可見其大小為650 bp的擴增片段。陽性對照應可見6條大小不同的擴增片段。

• 注意事項：

試劑使用前建議短暫離心后開啟。

PCR反應液請在冰中配制，以增強檢測的特異性。

本試劑盒中Master Mix包含電泳所必需的試劑，PCR反應后可直接電泳。